本文目录索引

• 1，在微生物培养中，对培养基常用什么法进行灭菌
• 2，有哪些食用菌种植常用的灭菌方法？
• 3，什么是食用菌的消毒与灭菌？常用的方法
• 4，食用菌的灭菌方法有多少种
• 5，微生物培养需要对培养基采用什么方法进行灭菌
• 6，组织培养所用的器皿如何清洗和灭菌？
• 7，培养基的灭菌流程

1，在微生物培养中，对培养基常用什么法进行灭菌

培养基的灭菌方法
1、高压蒸汽灭菌：
高压蒸汽灭菌适合于耐高温培养基、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌，分装后应立即灭菌，至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下，温度121℃时，灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长，也不能超过规定的压力范围，否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解，失去营养作用，也会使培养基变质、变色，甚至难以凝固。将蒸馏水或自来水装在三角瓶中，装水量一般不超过瓶的2/3，用牛皮纸或硫酸纸包扎封口，然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d，若无污染现象，则证明灭菌是彻底的，可以使用。暂时不用的培养基最好置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完，其他培养基最多也不要超过1个月。
2、过滤灭菌：
一些植物生长调节剂及有机物，如IAA、GA3、ZT、CM等，遇热容易分解，不能与培养基一起进行高温灭菌，而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜（孔径0.45微米）使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中，若为液体培养基，可在培养基冷却至30℃时加入；若为固体培养基，必须在培养基凝固之前（50-60℃）加入，振荡使溶液与其他成分混合均匀。

2，有哪些食用菌种植常用的灭菌方法？

在种植食用菌的时候，灭菌是一项非常重要的环节。主要采用的方法有高温灭菌，和使用化学药剂灭菌。 1、高温灭菌的方法，简单高效。在锯末装入袋子之后，往往会架起一个大锅，然后将袋子平铺在上面，用塑料薄膜浆已经装袋的锯末进行高温加热。在加热的过程中往往需要很长时间，在这个时间内需要保证塑料薄膜不漏气，如果漏气的话就会功亏一篑。锯末袋子上不了温度就会导致杀菌不彻底，在后期的种植过程中可能会有杂菌的出现。 2、用化学药剂进行杀菌也是一个不错的方式。但是这个方式没有用高温杀菌来的彻底，这一道工序主要用于后期的消毒。在锯末袋子高温消毒之后，移送到养殖棚中，往往需要用化学药剂再一次的进行杀菌处理。化学药剂通常采用的是硫磺，点燃硫磺之后将养殖棚密封，需要通过12个小时方可打开养殖棚进行通风换气。在这一个期间要特别的注意安全，一不留神就有可能自身中毒窒息而亡。 3、有时候也会采用70%的酒精进行杀毒灭菌。在点菌种的时候往往会采用70%的酒精对手部进行杀菌，这个环节是至关重要的，因为这个环节之后就需要进行附着养菌。在这个时候需要操作者对自身的手部进行消毒，并且需要穿着特殊的消毒后的衣服。而且在消毒的过程中需要用70%的酒精将装好的锯末袋子均匀的涂抹，保证菌种袋子上不附着其它的杂菌。 综上所述，在种植食用菇的时候，杀菌是一项非常繁琐的工序，在杀菌的过程中不仅需要注意自身的安全，同时也要认真仔细，将杀菌的工序做到完整。

3，什么是食用菌的消毒与灭菌？常用的方法

有哪些？ 灭菌是指在一定范围内，用物理或化学方法杀灭物料及容器中的一切微生物，包括微生物的营养体和休眠体，使物料成为无菌状态，是一种彻底的灭菌方法。消毒是指用物理或化学方法杀灭或清除基质中、物体表面及环境中的部分微生物，是一种不彻底的灭菌方法。 在食用菌的生产和科研中，主要使用物理、化学、生物方法来达到消毒或灭菌的效果，以物理、化学方法应用最为普遍。物理方法是用热力灭菌、辐射灭菌、过种名pH范围最适pH 种名pH范围适宜pH滤除菌等手段来杀灭微生物。在应用中，对培养基、工作服等常用高压蒸汽灭菌，金属接种工具采用灼烧灭菌，玻璃器皿等用干热灭菌。对一些不耐高温、体积较大的物品，还可以采用紫外线进行辐射灭菌。对热不稳定的生化试剂，如菌制剂、维生素的水溶液，则用过滤除菌的方法。 化学消毒与灭菌。主要利用化学药品中的酚、醇、酸、碱、重金属、氧化还原剂、表面活性剂、染料等化学药品，对器皿、工具等进行浸泡，对环境进行喷洒、熏蒸来达到消毒的目的。 生物灭菌或消毒，是利用生物来抑制或杀灭有害微生物的方法，还可以利用生物制剂来抑制或杀灭微生物。

4，食用菌的灭菌方法有多少种

灭菌有物理法和化学法，其中较多使用、而且效果好、效果稳定的是物理法的热力灭菌法。现介绍几种常用的方法。
一、高压蒸汽灭菌：要求有高压蒸汽锅，技术指标最高温达摄氏140度或2公斤/平方厘米压力。物品在密闭容器内，水经过加热产生高压蒸汽而提高温度达到杀菌的目的。一般培养基可用摄氏121度保持20分钟即可达到灭菌效果，已经把菌丝营养体、孢子、芽孢全部杀死。但如果基质内含有葡萄糖、马铃茨、豆芽汁、维生素等物质则应用摄氏115度保持20分钟为宜，否则过高温度会破坏营养物，而产生有毒物质不利于食用菌生长。木屑、蔗渣、棉籽壳、麦粒、草料、粪干等物质原来含菌量较大而且含水量较少，宜用摄氏129度保持12.5小时灭菌。
二、常压蒸汽灭菌：物品在锅内以常压蒸汽进行灭菌。通常蒸汽温度为摄氏95105度，因此灭菌的时间要求68小时才能达到效果。这种方法适合人力，燃料充足，未有能力购置高压蒸汽锅的地方使用。这种方法对保持培养基的养分较好。
三、间歇性灭菌法：对不宜超过摄氏100度高温的物品较好。培养基置锅内经摄氏100度高温蒸1小时，杀死杂菌的营养体，保温在摄氏2530度24小时，残留的孢子萌发成营养体。进行第二次蒸煮1小时，把萌发的孢子杀死。同法，进行第三次蒸煮1小时，保温等做法，即可达到完全灭菌的效果。
四、过滤除菌：一些不耐高温的物品经过机械阻留的技术把杂菌除去。如血清、维生素、氨基酸等物多用此法除菌。要求设置抽滤瓶和空气压缩机才能进行。
五、化学药剂灭菌法：常用的化学剂有氯化汞、高锰酸钾、漂白粉、福尔马林、酒精等。在食用菌栽培中，这些化学剂的灭菌效果不稳定，而且有些影响到产品的安全性，如氯化汞不宜用于食物，而多用于表面消毒或环境消毒。

5，微生物培养需要对培养基采用什么方法进行灭菌

要根据你的培养基成分来选择灭菌方式。
1.如果你的培养基中所有的成分都可以耐高温，那就用压力蒸汽高温灭菌的方式：121℃或者115℃30分钟。
2.如果你的培养基中有些成分不耐高温，就可以用除菌过滤的方式除菌：用除菌滤器过滤培养基至已灭菌的培养器中。
3.如何要求不高，部分试验用培养基，可以用煮沸的方式灭菌。
不知你是哪种培养基。

6，组织培养所用的器皿如何清洗和灭菌？

清洗 植物组织培养用的各种玻璃器皿，特别是培养瓶和盛培养基的器皿，一定要严格清洗，以防油污、重金属离子、酸、碱等有害物质残留在瓶内，影响培养物的生长。使用过的玻璃器皿应及时清洗，先将污物如培养基、培养物倒掉，再浸入水中，然后洗涤。玻璃器皿的洗涤，可根据器皿的污染程度和性质，采用不同的方法，通常有碱洗法和酸洗法。凡有微生物污染的器皿，必须先进行高压消毒和煮沸，以杀死菌体，否则会产生孢子飞扬，污染环境，给组织培养带来严重困难。器皿洗净后，应烘干或晾干，放在规定的地方，便于取用。
常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类，即：物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施；化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用湿热灭菌（培养基）培养基在制备后的24h内完成灭菌工序。高压灭菌针对如无菌水、栽培介质、接种用具，可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间。对于一些布制品，如实验服、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好，高压灭菌20-30min。
灼烧灭菌（用于无菌操作的器械 ）•在无菌操作时，把镊子、剪子、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰卜灼烧火菌。冷却后，立即使用。
干热灭菌（玻璃器皿及耐热用具）
过滤灭菌（不耐热的物质 ）一些生长调节剂，如赤霉素、玉米素、脱落酸和某些维生素是不耐热的，不能用高压灭菌处理，通常采用过滤灭菌方法。

7，培养基的灭菌流程

原理
培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
3材料
3.1器皿及材料
天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂
蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。
4流程
称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。
5步骤
5.1培养基的制备
5.1.1称量药品
根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
5.1.2溶解
用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。
5.1.3调节pH
根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。
5.1.4溶化琼脂
固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
5.1.5过滤分装
先将过滤装置安装好（图3-1）。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞， 引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。
5.1.6包扎标记
培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。
5.1.7灭菌
上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面(图3-2)，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。
5.1.8倒平板
将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板。
5.2灭菌方法
灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。
5.2.1.高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌（图3-4）。
5.2.1.1操作方法和注意事项如下
加水
打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。
装料、加盖
灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。
排气

打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。
升压、保压和降压
当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。
灭菌后的培养基空白培养
灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。
5.2.2干热灭菌法
通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。
干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。
5.2.2.1灭菌前的准备
玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。
5.2.2.2干燥箱灭菌
将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。
用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。
5.2.2.3火焰灭菌
直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。